Вирусный ринотрахеит кошек (FHV-1) ПЦР

Описание исследования

Цель исследования: качественный анализ для выявления ДНК вируса ринотрахеита кошек (Feline herpes virus)
Герпесвирус кошек (FHV), возбудитель вирусного ринотрахеита кошек, распространен – повсеместно. Описан только один серотип, однако вируленность отдельных штаммов вируса может отличаться.

В клетках кошки FHV реплицируется (размножается) в эпителиальных клетках конъюнктивы и верхних дыхательных путей, в нейронах. Инфицирование нейронов объясняет пожизненное вирусоносительство после первичного инфицирования.

Домашние кошки – основной хозяин FHV, но этот вирус также был выделен от гепардов и львов.

Опасность для человеческого здоровья: нет фактов, подтверждающих восприимчивость к данной инфекции человека

Устойчивость герпес-вируса во внешней среде: при 4⁰С сохраняется около 5 мес, при 25⁰С – около 1 месяца
вирус инактивируется за 3 часа при 37⁰С и за 5 мин при 56⁰С, чувствителен к большинству коммерческих дезинфектантов, антисептиков и детергентов.

Передача инфекции:
Передача через объекты окружающей среды – не является источником распространения, если речь не идет о совместном содержании кошек в группах более 4-5 особей (питомники/приюты).

Основной источник инфекции: кошки в острой стадии и носители в стадии обострения клинических симптомов. Трансплацентарная передача потомству – отсутствует. Восприимчивость котят раннего возраста к инфекции зависит от уровня материнских антител.

Виды течения герпес-вирусной инфекции:

Острая стадия заканчивается через 10-14 дней после инфицирования, при этом выделение вируса через слизистую  глаз и носа начинается через 24 часа после инфицирования и длится 1-3 недели. Классическая острая форма – поражение слизистых оболочек в виде ринитов, конъюнктивитов, изъязвление роговицы.Наиболее тяжелое течение отмечается у котят.
Начальные симптомы: саливация, слезотечение, кашель, подъем температуры, отказ от корма, депрессия; серозные или серозно-геморрагические истечения из глаз/носа, гиперемия конюънктивы.

Аборты, в отличие от герпес вирусной инфекции у других видов животных, для кошек не типичны.

Хроническая стадия характерна для некоторых переболевших кошек и характеризуется более глубоким вовлечением в патологический процесс верхних дыхательных путей и тканей глаза и развитием иммуно-опосредованных поражений в них (стромальный кератит, хронический риносинусит).
Переход в латентную форму инфекции после острой фазы объясняется проникновением вируса по сенсорным нервам в нейроны (особенно в тройничный ганглий), и характеризуется периодической реактивацией вируса с выделением во внешнюю среду через слизистые. Практически все кошки, перенесшие острую фазу, становятся пожизненными латентными вирусоносителями. Выделение вируса можно инициировать примерно в 70 % случаев с помощью лечения глюкокортикоидами. Другими факторами, индуцирующими повышение секреции эндогенного кортизола и реактивацию инфекции, будут  лактация (40 %) и переезд в новое помещение (18 %)
Лабораторная диагностика герпес-вирусной инфекции:

ПЦР диагностика – предпочтительный метод диагностики герпес-вирусной инфекции на острой стадии, основанный на выделении ДНК FHV из смывов с конюънктивы, носоглотки, соскобов с роговицы.
Не существует никаких прямых методов диагностики герпес-вирусной инфекции (с обнаружением ДНК или антигенов) на хронической и тем более латентной стадии.
Применение серологического тестирования ограничено по следующим причинам. Первое, антитела вырабатываются к 20-30 дню после первичной инфекции. Второе, уровень антител может быть низкий, независимо от того в какой стадии, острой или хронической, находится животное. Третье, из-за широкого распространения в природе герпес-вируса и применения вакцинации, многие кошки серопозитивны (т.е. имеют положительный титр специфических АТ).

Подготовка к исследованию

Требования к пробе: Обратите внимание!!! Перед сбором материала для ПЦР нельзя использовать флюоресцин и местные анестетики, так как они влияют анализа (ингибируют процесс амплификации НК). - наиболее информативен смывы с коньюктив глаз. - при отсутствии поражений в ротовой полости рекомендуем воздержаться от сбора материала из рта! Общие правила взятия смывов: - смывы с конъюнктивы глаз берется с использовнаием стерильных зондов с ватными тампонами и стерильных пробирок объемом типа Эппендор на 1,5 мл, содержащие 300-500 мкл стерильного физиологического раствора. При наличии на веках корочек или гноя предварительно убрать их стерильной салфеткой смоченной физиологическим раствором. Зонд смочить в жидкости и отжать влагу, прислоняя ватный наконечник к внутренней стенке пробирки. Оттянув веко животного, провести зондом по слизистой века по направлению к носу обмывая глазное яблоко. Тщательно прополоскать зонд в пробирке и аккуратно отжать лишнюю влагу, прижимая наконечник к внутренней стенке пробирки. Тем же ватным зондом повторить процедуру с каждым веком обоих глаз, собирая материал в одну и ту же пробирку. Зонд утилизировать, пробирку плотно закрыть крышкой до щелчка. - Смывы с носовой и ротовой полости берутся аналогично. Для смывов из ротовой полости при отсутствии эррозий предпочтение отдается верхнему своду (небу), так как нижняя челюсть, подъязычная область обсеменены бактериальной микрофлорой. Избегать попадание слюнной жидкости в пробирку с транспортной средой. КАТЕГОРИЧЕСКИ запрещено: оставлять ватные зонды в пробирке при предоставлении проб в лабораторию Хранение и доставка: Материал для анализов доставляется в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при +2-+8⁰С. FHV инфекция часто представлена в комбинации с калицивирусной инфекцией и/или инфекцией Chlamydophila felis, Bordetella bronchiseptica, Mycoplasma spp., поэтому рекомендуется одновременное исследование с этими патогенами. Другие микроорганизмы, включая Staphylococcus spp. и Escherichia coli, могут приводить к так называемой мультиагентной вторичной инфекции респираторного тракта.

Требование к биоматериалу

1. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо после вакцинации выдержать минимум 2-3 недели перед сдачей анализа. 2. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо выдержать 2-3 недели после лечения перед сдачей анализа. Контроль за болезнью Для домашних кошек, живущих в группе или в приюте: Всех новых кошек с характерными клиническими симптомами необходимо тестировать методом ПЦР, так как высока опасность распространения инфекции. Экспериментально доказано, что при введении в группу особей выделяющих вирус в количестве 4 % от общей численности всей группы, через 1 неделю количество кошек, выделяющих вирус увеличится до 50 %. Поэтому для вновь прибывших необходим карантин – как минимум 3 недели. Для клинически здоровых кошек предписана вакцинация. При возникновении вспышки инфекции необходимо провести дифференциальную диагностику герпес вирусной инфекции (FHV) от калицивирусной инфекции (FCV) Для владельцев питомников: Наибольший риск инфицирования и развития болезни у котят до отъема – 4-8 недель, когда падает материнский иммунитет. Источник инфекции – кошки-латентные носители инфекции, в которых прошла реактивация вируса на фоне лактации. Однако, кошки с достаточным уровнем защитных АТ (тестирование на определение титра АТ) передадут защитный уровень материнских АТ с молозивом, что гарантирует сопротивляемость организма котят к герпесвирусной инфекции на первых неделях жизни. ВАЖНО! 1. Чтобы избежать ложноположительных результатов необходимо выдержать 2-3 недели после лечения перед сдачей анализа. 2. Положительный результат при отсутствии клинической картины заболевания может означать бактерио-/вирусоносительство.