Пастереллез (Pasteurella multocida) ПЦР

Описание исследования

1. Цель исследования: выявление ДНК возбудителя пастереллеза (Pasteurella multocida) в биологическом материале и кормах.

2. Метод: ПЦР (полимеразная цепная реакция).

3. Форма заключения по результатам исследования: качественная реакция (результат: положительный/отрицательный).

4. Единицы измерения: нет.

5. Виды животных: собаки, кошки, птицы, КРС, МРС, свиньи, лошади.

Подготовка к исследованию

1. Голодная диета: не требуется. 2. Факторы, влияющие на результат исследования: 1) возможны ложноположительные результаты, если • после лечения прошло менее 2 – 3-х недель; • после вакцинации прошло менее 3 – 4-х недель перед сдачей анализа. 2) возможны ложноотрицательные результаты, если в пробирке со взятым материалом содержание эпителиальных клеток менее 10 клеток в 1 мкл. 3) Вещества, влияющие на образец: • антикоагулянты: гепарин, цитрат натрия; • любые масло- и жиросодержащие вещества (вазелиновое масло, крема, мази); • спиртосодержащие вещества (растворы йода, бриллиантовой зеленый, 70%-40% спирт); • Детергенты (растворы для дезинфекции поверхностей, моющие средства); • УФ излучение.

Требование к биоматериалу

1. Вид материала: 1) Материал, не требующий оформления дополнительной пробоподготовки: ● мазки со слизистой оболочки носа, глотки; ● мазки со слизистой оболочки прямой кишки при диарее. ● молоко из пораженных долей при мастите; ● кал от птиц. 2) Материал, требующий оформления и оплаты дополнительной пробоподготовки (код 1944 «Дополнительная пробоподготовка биоматериала для ПЦР (кроме аборт. плодов)»: ● паренхиматозные органы (легкие, воздухоносные мешки (птица), селезенка, кишечник и др.); ● лимфоузлы; ● корма (гранулированные или консервированные корма/сырье). 2. Пробирка (контейнер): ● для мазков со слизистой оболочки носа, глотки, прямой кишки – эппендорф с физиологическим раствором; ● для молока из пораженных долей, кала птиц, паренхиматозных органов, лимфоузлов, корма – стерильные контейнеры с крышкой. Возможна замена стерильного контейнера с крышкой на герметичный стерильный пакет, кроме материала «молоко». 3. Объем материала: ● мазки со слизистой оболочки носа, глотки, прямой кишки – 0,5 мл; ● молоко из пораженных долей – для собак 0,5-1 мл, для КРС, МРС – 10-15 мл; ● паренхиматозные органы – кусочки размером 5 х 5 х 5 см; ● лимфоузлы – берут целиком; ● кал от птиц – 1-3 г (1-3 мл); ● корма – пробы весом 20-50 г. 4. Правила взятия материала: ● Мазки со слизистой оболочки носа, глотки, прямой кишки – см. описание кода 1917 «Взятие мазка для ПЦР». ● Молоко из пораженных долей берется 2-мя способами: сцеживанием или пункцией: А) Сцеживание Перед взятием проб молока вымя / молочные железы обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70% спиртом. Для исследования из каждой доли вымени / пакета молочной железы берут последние порции молока в количестве 10 - 15 мл для КРС/МРС и 0,5 – 1 мл для собак в отдельные стерильные пробирки с герметичными крышками. Важно соблюдать правила септики/антисептики для предотвращения контаминации образца при взятии. Б) Пункция Для взятия молока пункцией, животное фиксируют в боковом положении (при необходимости), вымя / молочную железу у основания соска протирают 70% спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска. После попадания иглы в цистерну / пакет молочной железы (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. ● паренхиматозные органы, лимфоузлы: Лимфоузлы берут целиком. Из органов и тканей вырезают кусочки 5 х 5 х 5 см, каждый орган помещается в отдельный герметичный пакет без физраствора, подписывается. Органы, расфасованные в отдельные пакеты от одного животного, складываются в общий пакет и маркируются идентификатором животного. ● корма – пробы весом 20-50 г. отбирают в сухую, стерильную, герметичную емкость. Возможен прием корма в не вскрытой заводской упаковке, если его масса не более 100 гр. 4. Хранение: - молоко - при температуре 2 - 8 °С в течение 24-х часов; - кал от птиц, мазки со слизистых оболочек – при температуре 2 - 8 °С в течение 48-ми часов; - корма - при температуре 2 - 8 °С в течение 48-ми часов; в заводской упаковке – согласно условиям и срокам хранения указанным на упаковке. - паренхиматозные органы: при температуре 2 - 8 °С - в течение 48-ми часов при температуре не выше минус 16°С - 14 дней. 5. Доставка: - Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. - Остальной материал доставляется в лабораторию не более допустимого срока хранения, в охлажденном или замороженном виде. - Размораживание в процессе доставки недопустимо!