Бруцеллез(Brucella spp) ПЦР

Описание исследования

Животные: Собаки, КРС, МРС

Выявление ДНК возбудителя бруцеллеза (микроорганизмов Рода Brucella: Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella ovis, Brucella canis методом ПЦР в реальном времени.

Требование к биоматериалу

Материал для исследования: Материал, НЕ требующий оформления пробоподготовки: - сперма, моча - молоко от абортировавших животных - содержимое бурс и гигром - выделения из половых путей, взятые в первые 5 дней после аборта Материал, требующий оформления дополнительной пробоподготовки. - Абортированный плод целиком или пат. материал от него (содержимое брюшной полости и желудка, околоплодная жидкость или слизь между оболочками и плодом), парензиматозные органы (селезенка, печень, сердце, почки)). - плацента и плодовые оболочки от абортировавших животных; - в случае диагностического убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы (не менее 7 пар) подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); - от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. Для пат органов и абортированных плодов необходимо дополнительная утилизация отходов по весу на момент поступления в лабораторию Правила отбора проб для исследования: 1) Лимфоузлы берут целиком. 2) Жидкости для исследования, кроме молока, отбирают в объеме 5 - 10 мл в стерильные контейнеры. 3) Из органов и тканей вырезают кусочки не более 5 х 5 х 5 см, каждый орган помещается в отдельный герметичный пакет, подписывается. Органы, расфасованные в пакеты, от одного животного складываются в общий пакет и маркируются идентификатором животного. Доставляются в лабораторию в течение 2-х часов после отбора. При не возможности соблюсти данное требование, отобранный пат материал замораживается и через 1 сутки в замороженном виде доставляется в лабораторию, размораживание при транспортировке не допускается. 4) Взятие содержимого гигром, бурс. В области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с плотной пробкой. 5) Молоко. Взятие осуществляется двумя способами: сцеживанием и пункцией. Сцеживание. Перед взятием проб молока вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10 - 15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками. У собак при взятии проб молока соски обмывают теплой водой и обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждого соска сцеживают около 0,5-1 мл молока в стерильнуюпробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. Взятие пробы молока путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. Молоко должно быть доставлено в лабораторию в день взятия пробы. 6) Абортированные плоды весом до 1 кг берется целиком. Плод помещается в отдельный чистый пакет, маркируется. Если вес плода более 1 кг, то необходимо провести вскрытие плода и взятие органов для исследования. Хранение: в холодильнике не более 48 часов при температуре +2-+8⁰С моча храниься не более суток (24 часа) при температуре +2-+8⁰С более длительное хранение при температуре не выше -16⁰С, кроме кровии мочи. Молоко и моча должны быть доставлены в лабораторию в день взятия пробы.

Диагностическая информация

Возбудителем бруцеллеза являются микроорганизмы, относящиеся к роду Brucella. По международной классификации род Brucella состоит из шести самостоятельных видов, которые подразделяются на ряд биоваров. Так, B.melitensis состоит из 3 биоваров, носителями которых являются козы и овцы. B.abortus представлен 7 биоварами, основной хозяин возбудителя - крупный рогатый скот. B.suis состоит из 5 биоваров, основной хозяин - свиньи, однако носителем 2-го биовара являются также зайцы, 4-го биовара - олени, а 5-го - мышевидные грызуны. B.neotomae была обнаружена у пустынных кустарниковых крыс. B.ovis выделяется от овец, а B.canis - от собак. На территории России циркулируют B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.ovis, а с 1994 г. регистрируются случаи выделения от собак бруцеллы вида canis. Бруцеллезом болеют в основном сельскохозяйственные животные - овцы, козы, крупный рогатый скот, свиньи, верблюды, северные олени и др. Причем каждый вид животных обычно поражается определенным видом возбудителя. Однако бруцеллы вида melitensis и abortus могут мигрировать на других животных. Это имеет большое эпидемиологическое значение, особенно в случае миграции наиболее опасного для человека вида melitensis на крупный рогатый скот. Микроб проникает в организм животного через слизистые оболочки пищеварительного тракта, половых и дыхательных путей, конъюнктиву, а также через кожные покровы в случае нарушения их целостности. Клиническое течение бруцеллеза у животных характеризуется полиморфизмом, основным признаком является аборт. Аборты имеют решающее значение в эпизоотологии и эпидемиологии бруцеллеза, т.к. сопровождаются массивным и длительным выделением бруцелл с абортированным плодом, плацентой, выделениями из матки и влагалища, при метритах и других поражениях половых и родовых органов. Больные животные могут выделять бруцеллы с молоком и мочой. Таким образом, выделение большого количества бруцелл при абортах и родах больных животных, а также с молоком является основным фактором распространения инфекции в хозяйстве, а нередко и заражения людей. Помимо абортов бруцеллез у животных может сопровождаться поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой сферы (эндометриты, вагинит, у самцов - орхит, эпидидимит), молочных желез (мастит). Бруцеллез у животных может протекать в скрытой форме и обнаруживаться лишь при специальном исследовании. Распространять возбудителя инфекции могут и животные, не имеющие клинических проявлений бруцеллеза, но положительно реагирующие при обследовании на бруцеллез. Отдельные животные остаются носителями бруцелл и выделяют их в течение 5 лет и более.